wb 蛋白处理的方法有哪些?
2024-04-12 阅读 10
WB(Western Blot)蛋白处理的方法主要包括以下几个步骤:
1. 细胞裂解:将待检测的细胞或组织样品进行细胞裂解,释放蛋白质。
2. 蛋白质浓缩:使用方法如超声破碎或离心等手段,将蛋白质从裂解液中提取出来。
3. 蛋白质定量:使用BCA、Lowry或Bradford等方法测定蛋白质的浓度。
4. SDS-PAGE电泳:将蛋白质样品加入SDS-PAGE凝胶中进行电泳分离。
5. 蛋白转印:将SDS-PAGE凝胶中分离的蛋白转移到膜上,常用的方法有湿式转印和半干式转印。
6. 膜上抗原识别:使用特异性的抗体结合目标蛋白,常见的抗体有一抗和二抗。
7. 蛋白检测:使用化学发光或染色等方法检测目标蛋白的表达水平。
以上是 WB 蛋白处理的主要步骤,具体的操作方法会根据实验的具体要求和样品特点进行调整。
更新于 2024年11月21日