用慢病毒感染插入shRNA序列的方式敲低目的基因，qPCR结果与WB结果不符怎么办？
2023-10-30 阅读 43
如果使用慢病毒感染插入shRNA序列的方式敲低目的基因，并且qPCR结果与Western blot (WB)结果不符，可能有以下几种原因和解决方法：
1. 表达时间：qPCR可以在短时间内检测到基因的mRNA水平变化，而WB需要更长的时间才能检测到蛋白质水平的变化。因此，如果你的实验时间较短，可能会出现qPCR结果显示基因表达下降，但WB结果尚未显示明显的蛋白质水平变化。解决方法是延长实验时间，等待足够的时间以观察到蛋白质水平的变化。
2. shRNA效力：可能存在shRNA效力不足的情况，导致qPCR结果显示基因表达下降，但WB结果未显示明显的蛋白质水平变化。解决方法是验证shRNA的效力，可以使用其他方法如siRNA或CRISPR/Cas9来验证目的基因的敲低效果。
3. 技术问题：可能存在实验操作或技术问题，导致qPCR和WB结果不一致。解决方法是仔细检查实验步骤，确保实验操作的准确性和一致性。另外，还可以尝试使用其他检测方法来验证结果，如免疫组化或免疫组织化学。
4. 其他因素：还有其他因素可能导致qPCR和WB结果不一致，如转录后修饰、蛋白质稳定性等。在解释结果时需要综合考虑这些因素，并进行进一步的实验验证。
总之，当qPCR结果与WB结果不符时，需要仔细分析可能的原因，并进行相应的实验验证和技术优化，以确保结果的准确性和可靠性。
更新于 2023年10月30日
