构建点突变质粒突变引物重复添加，已尝试过更改退火温度和引物重叠的碱基数，没有效果，求教各位大佬？
2024-04-11 阅读 13
如果已经尝试过更改退火温度和引物重叠的碱基数仍然没有效果，那么可以考虑尝试以下方法：
1. **优化引物设计**：确保引物的序列和结构符合设计要求，可以使用专业的引物设计软件来进行优化。
2. **检查模板质量**：确保模板DNA的质量良好，可以通过测序确认模板序列是否正确。
3. **尝试不同的PCR条件**：除了退火温度和引物重叠的碱基数，还可以尝试调整PCR反应体系中的其他条件，如Mg2+浓度、引物浓度、循环次数等。
4. **考虑使用高保真聚合酶**：使用高保真聚合酶可以提高PCR反应的特异性和效率。
5. **尝试其他PCR方法**：如果仍然无法解决问题，可以考虑尝试其他PCR方法，如nested PCR、touchdown PCR等。
希望这些建议对您有帮助，祝您成功解决问题！
更新于 2024年11月21日
