双荧光素酶报告基因系统检测原理是什么？
2023-12-27 阅读 32
双荧光素酶报告基因系统是一种常用于基因表达研究的技术。其原理基于双荧光素酶（Dual-Luciferase）体系，由荧光素酶（Luciferase）和底物荧光素（Luciferin）组成。
在该系统中，待测基因的启动子或调控序列被克隆到荧光素酶报告基因载体中，与荧光素酶基因（如火鳥荧光素酶或蜥蜴荧光素酶）构成融合基因。同时，另外一个稳定表达的荧光素酶基因（如海洋螢光素酶）也被克隆到同一载体中，作为内参基因。
在实验中，细胞或组织被转染或转化后，待测基因的启动子或调控序列会驱动荧光素酶基因的表达。当底物荧光素添加到细胞中时，荧光素酶会催化底物的氧化反应，产生荧光信号。该荧光信号可以通过荧光素酶检测仪器进行定量测量。
同时，内参基因的荧光素酶基因也会被表达，产生荧光信号。内参基因的荧光信号用来校正实验中的变异性，例如细胞数目、转染效率等。
通过测量待测基因和内参基因的荧光信号，可以计算出待测基因的相对表达水平。这种技术可以用于研究基因调控、筛选药物、评估基因功能等。
更新于 2023年12月27日
