有人做p21基因的蛋白纯化么？条件都是啥啊？求助 ?
2023-11-11 阅读 28
是的，有人进行过p21基因的蛋白纯化。蛋白纯化的条件可以因实验目的和具体实验室的设备和经验而有所不同，但一般包括以下步骤：
1. 表达：将p21基因导入表达宿主细胞（如大肠杆菌）中，通过诱导表达使其产生p21蛋白。
2. 细胞破碎：将表达的细胞收获后，使用细胞破碎方法（如超声波破碎、高压破碎等）破碎细胞膜，释放蛋白。
3. 蛋白分离：通过离心等方法，将细胞碎片与非溶解性成分分离。
4. 亲和纯化：利用p21蛋白与某种特定亲和标记结合的特性，使用亲和层析柱（如Ni-NTA层析柱）进行蛋白纯化。
5. 洗脱：将与亲和标记结合的蛋白从层析柱上洗脱下来，得到部分纯化的p21蛋白。
6. 离子交换层析：利用离子交换层析柱，根据p21蛋白的电荷性质进行进一步纯化。
7. 凝胶过滤层析：利用凝胶过滤层析柱，根据蛋白分子量的大小进行进一步纯化。
8. 结晶：如果需要，可以进行蛋白结晶，得到纯度更高的p21蛋白。
需要注意的是，具体的条件和步骤可能因实验室的设备和经验而有所不同。此外，p21蛋白的纯化还可能受到蛋白的稳定性、溶解性等因素的影响，需要根据具体情况进行优化。如果您需要进行p21蛋白纯化，建议咨询实验室的专业人士或相关文献以获取更详细的信息和建议。
更新于 2023年11月11日
