RNA 建库流程中如何进行 PCR 扩增？
2023-10-30 阅读 24
在RNA建库流程中，PCR扩增通常用于从RNA样本中合成cDNA。下面是一般的PCR扩增步骤：
1. 反转录：首先将RNA转录为cDNA，使用逆转录酶和引物。逆转录酶可以合成cDNA链，引物则提供反向扩增的起始序列。
2. Denaturation（变性）：将反转录产生的混合物加热至高温，使cDNA链分离为单链。
3. Annealing（退火）：将温度降低至引物的退火温度，使引物与cDNA链的互补序列结合。
4. Extension（延伸）：在退火温度下，加入DNA聚合酶和四种核苷酸，让DNA聚合酶沿着引物延伸合成新的DNA链。
5. 循环扩增：重复以上步骤，通常需要进行多个循环，以扩增所需的目标DNA片段。
PCR扩增的循环次数和温度条件可以根据需要进行调节，以获得所需的扩增产物。
更新于 2023年10月30日
