质粒降解会导致转染效果下降,验证质粒是否降解可以通过以下方法:
酶切:将质粒进行限制性酶切,然后进行凝胶电泳检测,如果出现异常条带或者质粒带消失,则说明质粒可能已经降解。
质粒提取:使用质粒提取试剂盒提取质粒,然后进行凝胶电泳检测,如果出现异常条带或者质粒带消失,则说明质粒可能已经降解。
测序:将质粒进行测序,如果测序结果与预期不符,或者出现插入、缺失、错义等异常情况,则说明质粒可能已经降解。
转染对照组:在转染时设置对照组,如果对照组的转染效果正常,而实验组的转染效果下降,则说明质粒可能已经降解。
需要注意的是,反复冻融会导致质粒降解,因此在使用质粒时应尽量避免反复冻融。