在CRISPR-CAS9系统中,sgRNA引物需要与目标DNA靶序列互补,并且在3'端需要包含PAM序列,通常为NGG。因此,在设计sgRNA引物时,必须确保引物的3'端包含正确的PAM序列。如果额外添加了NGG,可能会导致引物与非目标DNA序列发生杂交,从而影响后期基因编辑的特异性和效率。因此,设计sgRNA引物时应该避免额外添加NGG。