表达含有一个跨膜结构域的蛋白怎么表达？
2023-04-20 阅读 65
表达含有一个跨膜结构域的蛋白通常需要进行以下步骤：
1. 克隆基因：首先需要克隆含有目标跨膜结构域的基因序列。
2. 设计引物：根据基因序列设计引物，通常包括启动子、多聚体化序列、跨膜结构域和终止密码子。
3. 构建表达载体：将引物克隆到表达载体中，通常选择一些常用的表达载体，例如pET、pGEX、pcDNA等。
4. 转染细胞：将表达载体转染到目标细胞中，通常使用一些常用的细胞系，例如E. coli、CHO、HEK293等。
5. 表达蛋白：待细胞转染后，使用合适的诱导剂（例如IPTG、Doxycycline等）诱导目标蛋白的表达。
6. 纯化蛋白：使用一些常用的蛋白纯化方法，例如亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤层析、透析等，纯化目标蛋白。
7. 鉴定蛋白：使用一些常用的蛋白鉴定方法，例如SDS-PAGE、Western Blot、质谱等，鉴定目标蛋白的纯度和活性。
更新于 2023年04月21日
