各位老师，免疫荧光（IF）做出来，细胞上没有二抗荧光，甚至背景也没有一点荧光，是什么原因？
2023-09-05 阅读 33
免疫荧光（IF）实验中，如果细胞上没有二抗荧光，甚至背景也没有一点荧光，可能有以下几种原因：
1. 抗体问题：可能是一抗或二抗存在问题。一抗可能没有与目标抗原结合，或者抗体质量不好，不具有特异性。二抗可能没有与一抗结合，或者二抗质量不好，无法产生荧光信号。
2. 细胞处理问题：细胞可能没有被充分固定或渗透，导致抗体无法进入细胞内结合目标抗原。此外，细胞处理过程中可能存在其他问题，如温度、时间等因素不当，都可能影响荧光信号的产生。
3. 荧光显微镜问题：荧光显微镜的设置可能存在问题，如曝光时间、滤光片选择等。这些因素都会影响荧光信号的检测和显示。
4. 其他实验条件问题：实验过程中的其他条件，如缓冲液的配制、洗涤步骤的操作等，都可能对荧光信号产生影响。
为了确定问题的原因，可以逐步排查。首先，检查实验步骤和条件是否正确，包括抗体的选择和质量，细胞处理的方法和条件，以及荧光显微镜的设置。如果问题仍然存在，可以尝试使用其他抗体或重新优化实验步骤，直到获得预期的荧光信号。
更新于 2023年09月05日
