#知乎提问#做RCA扩增的我想请教一下，为啥进行RCA反应后电泳验证，跑不下来，一直是孔那里亮?
2024-12-29 阅读 63
进行RCA（Rolling Circle Amplification）反应后进行电泳验证时，如果所有的样品孔都显示为亮，而没有出现预期的DNA条带，可能是由于以下几个原因造成的：
1. **未加入DNA模板：** 在RCA反应中，如果没有加入DNA模板作为起始物质，就不会有DNA条带被扩增出来，导致电泳结果中所有孔都显示为亮。
2. **DNA模板质量问题：** 如果DNA模板质量不佳，可能会导致RCA反应失败，无法产生预期的DNA条带。
3. **反应条件问题：** RCA反应的温度、时间、酶的活性等条件设置不当，也可能导致扩增效率低，无法产生明显的DNA条带。
4. **酶活性问题：** 如果使用的DNA聚合酶活性受到影响，也会影响RCA反应的进行。
5. **污染：** 实验过程中可能存在外源DNA污染，干扰了RCA反应的进行，导致结果异常。
建议您检查实验步骤是否按照标准操作进行，尤其是检查是否加入了DNA模板，以及检查反应条件和试剂质量是否符合要求。如果仍然无法解决问题，可以尝试优化实验条件或更换试剂，或者考虑使用其他方法进行验证。
更新于 2024年12月30日
